超氧化物歧化酶活力测定PPT

超氧水杨酸（Superoxide Dismutase，简称SOD）是一种广泛存在于各种生物体内的抗氧化酶，其主要作用是清除细胞内的超氧自由基，保护细胞免受...

超氧水杨酸（Superoxide Dismutase，简称SOD）是一种广泛存在于各种生物体内的抗氧化酶，其主要作用是清除细胞内的超氧自由基，保护细胞免受氧化应激的损害。SOD的活力测定在生物医学、食品科学、环境科学等领域具有重要意义。以下是一种超氧水杨酸活力测定的方法，具体步骤如下：准备实验材料超氧水杨酸标准品磷酸缓冲液（PBS）邻苯三酚（OPP）甲硫氨酸（Met）乙二醛四乙酸二钠（EDTA-2Na）考马斯亮蓝G-250实验管紫外可见分光光度计离心机移液枪配制试剂OPP溶液将邻苯三酚溶解于磷酸缓冲液中，配制成10mmol/L的溶液Met溶液将甲硫氨酸溶解于磷酸缓冲液中，配制成10mmol/L的溶液SOD酶液将待测样品加入磷酸缓冲液中，用移液枪将样品反复吹吸混匀SOD底物溶液将邻苯三酚和甲硫氨酸按1:1的比例混合，配制成10mmol/L的溶液EDTA-2Na溶液将乙二醛四乙酸二钠溶解于磷酸缓冲液中，配制成1mmol/L的溶液考马斯亮蓝G-250溶液将考马斯亮蓝G-250溶解于甲醇中，配制成0.1%的溶液操作步骤对照管取1mL OPP溶液、1mL Met溶液、1mL SOD底物溶液、1mL EDTA-2Na溶液和1mL磷酸缓冲液，加入实验管中，用移液枪将管内液体轻轻吹吸混匀。在30℃恒温下反应30分钟，然后加入1mL考马斯亮蓝G-250溶液，混匀后静置10分钟。在560nm波长下测定吸光度（A对照）实验管取1mL SOD酶液、1mL OPP溶液、1mL Met溶液、1mL EDTA-2Na溶液和1mL磷酸缓冲液，加入实验管中，用移液枪将管内液体轻轻吹吸混匀。在30℃恒温下反应30分钟，然后加入1mL考马斯亮蓝G-250溶液，混匀后静置10分钟。在560nm波长下测定吸光度（A实验）计算根据以下公式计算SOD活力。SOD活力（U/mL）= [(A对照 - A实验) / A对照] × 反应时间（分钟） × V酶液 / V样品其中，A对照为对照管的吸光度，A实验为实验管的吸光度，反应时间为30分钟，V酶液为酶液体积（mL），V样品为样品体积（mL）注意事项在操作过程中要保持恒温环境以避免温度波动对实验结果的影响在加入考马斯亮蓝G-250溶液后要静置一段时间以保证染料的充分结合在测定吸光度时要选择合适的波长以保证测量的准确性