质粒提取过程PPT

质粒提取是一种常用的分子生物学技术，用于从细胞中分离质粒DNA。以下是一般的质粒提取过程：材料和试剂培养的细菌（例如大肠杆菌）碱性裂解缓冲液（例如SK缓冲...

质粒提取是一种常用的分子生物学技术，用于从细胞中分离质粒DNA。以下是一般的质粒提取过程：材料和试剂培养的细菌（例如大肠杆菌）碱性裂解缓冲液（例如SK缓冲液）氯仿异戊醇乙醇70%乙醇TE缓冲液（10 mM Tris-HCl1 mM EDTA, pH 8.0）10%SDS醋酸钾醋酸钠高盐TE缓冲液（1 M NaCl10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0）Tween 20步骤菌体培养选择适合的细菌并在含有适量的抗生素的LB培养基上进行培养。培养温度通常为37°C，摇床速度约为200 rpm。当菌体培养达到对数生长期时，进行下一步菌体收集将培养物通过离心机进行收集。在离心前，需要将培养基进行过滤以去除菌体残渣。收集的菌体用适量的TE缓冲液重悬菌体裂解加入SDS至终浓度为1%，并加入适量的醋酸钾和醋酸钠，使pH达到7.5～8.0。同时加入适量的Tween 20，充分混合后，将混合物在冰上静置10～20分钟，使细胞裂解质粒提取加入2体积的氯仿/异戊醇（氯仿和异戊醇体积比为2:1），轻轻翻转混合物以使氯仿和异戊醇充分混合。然后在室温下静置10分钟，期间轻轻翻转混合物几次。之后，以每分钟10000～12000转的速度离心15分钟。上层水相中含有提取的质粒DNA乙醇沉淀向上层水相中加入1体积的异戊醇和1/10体积的醋酸钠，轻轻翻转混合均匀后，在室温下静置10分钟。然后以每分钟12000转的速度离心15分钟，弃上清液，收集沉淀的DNA洗涤加入70%乙醇清洗沉淀的DNA两次，以去除残留的盐和其他杂质。之后在室温下离心去乙醇干燥和储存将沉淀的DNA在真空干燥器中干燥或在37°C烘箱中干燥。干燥后，加入适量的TE缓冲液溶解DNA，然后可以将其储存在4°C或-20°C冰箱中以上是质粒提取的一般步骤，但具体步骤可能因实验条件和所用细菌的类型而有所不同。例如，有些质粒可能需要在特定的盐浓度下进行提取，有些可能需要使用特殊的裂解剂或螯合剂等等。