鸡球虫病实验室诊断PPT

鸡球虫病是一种常见的家禽肠道传染病，主要由艾美球虫属、泰泽球虫属和温扬球虫属等球虫引起。球虫病对鸡的危害较大，可引起鸡的贫血、消瘦、消化不良、食欲减退等症...

鸡球虫病是一种常见的家禽肠道传染病，主要由艾美球虫属、泰泽球虫属和温扬球虫属等球虫引起。球虫病对鸡的危害较大，可引起鸡的贫血、消瘦、消化不良、食欲减退等症状，严重感染时甚至可以引起鸡的死亡。在实验室诊断中，通常需要进行病原学检查、血清学检查和分子生物学检查等方法以确诊鸡球虫病。病原学检查病原学检查是确诊鸡球虫病最常用的方法，主要通过采集鸡的粪便或肠内容物进行检测。具体步骤如下：粪便采集在鸡笼下面放置一块塑料布，收集3-5天的粪便，将其放入密封袋中，标记后送至实验室肠内容物采集用手指扩张鸡的肛门，用剪刀剪开肠道，采集肠壁上的内容物，放入密封袋中，标记后送至实验室样品处理将采集的粪便或肠内容物用生理盐水稀释，然后进行离心沉淀，弃去上清液，留取沉淀物备用显微镜检查将沉淀物涂片，干燥后用甲醇固定，然后用姬姆萨染液染色，干燥后用显微镜检查。如果在粪便或肠内容物中发现球虫卵囊或滋养体，即可确诊鸡球虫病血清学检查血清学检查是一种间接检测鸡球虫病的方法，主要通过检测鸡血清中的特异性抗体来推断是否感染球虫。具体步骤如下：血清采集首先采集鸡的血液，将其放置在离心管中，静置一段时间后将血清分离出来，收集5-10ml血清，标记后送至实验室抗体检测将血清用生理盐水稀释100倍，然后取100ul加入到微量反应板中。加入已知的球虫抗原，用PBS作为阴性对照。用振荡器混匀后置入37℃恒温箱中孵育1小时加二抗加入用球虫抗原包被的特异性抗体（二抗），用PBS作为阴性对照。用振荡器混匀后置入37℃恒温箱中孵育1小时显色反应加入底物溶液，用振荡器混匀后置入37℃恒温箱中孵育10-30分钟。加入终止液终止反应，用振荡器混匀后进行比色。如果在血清中检测到特异性抗体，即可确诊鸡球虫病分子生物学检查分子生物学检查是一种快速、准确诊断鸡球虫病的方法，主要通过PCR等核酸扩增技术检测球虫的特异性基因片段。具体步骤如下：样品采集采集感染鸡的肠道、粪便等样品，标记后送至实验室DNA提取将样品加入适量的细胞裂解液中，用组织匀浆器充分研磨后加入蛋白酶K处理。加入酚-氯仿抽提液进行抽提，然后用氯仿-异戊醇进行抽提。最后用无水乙醇沉淀DNA，干燥后用ddH2O溶解PCR扩增根据已知的球虫基因序列设计特异性的引物，将DNA模板和引物加入到PCR反应液中，进行PCR扩增。一般情况下，需要设置阴性对照和阳性对照以验证试验的准确性产物检测将PCR扩增产物进行凝胶电泳检测，观察是否有特异性条带出现。如果在凝胶电泳中发现目标基因片段，即可确诊鸡球虫病以上是鸡球虫病实验室诊断的主要方法。需要注意的是，这些方法具有一定的操作难度和要求，因此在实际应用中需要由专业人员进行操作。