总RNA的提取及质量检测PPT

总RNA的提取及质量检测是生物学和医学研究中的重要步骤，以下是详细的步骤和注意事项：总RNA的提取RNA的提取主要分为以下步骤：细胞裂解、蛋白质去除、RN...

总RNA的提取及质量检测是生物学和医学研究中的重要步骤，以下是详细的步骤和注意事项：总RNA的提取RNA的提取主要分为以下步骤：细胞裂解、蛋白质去除、RNA的沉淀和洗涤。以下是一种常用的RNA提取方法，即TRIzol法。细胞裂解TRIzol是一种可以同时裂解细菌和动物细胞的试剂，可以释放出RNA。将TRIzol加入到已生长好的细胞中，在冰上静置5分钟，然后匀浆蛋白质去除加入氯仿，混合均匀，然后在室温下静置15分钟。然后，将混合物在离心机中以高速离心，分出上层水相和下层有机相。水相中含有RNA，而有机相中含有蛋白质RNA的沉淀向水相中加入异丙醇，混合均匀后，在室温下静置10分钟。然后，再次离心，收集沉淀洗涤用75%乙醇洗涤RNA沉淀，然后在离心机中高速离心，去掉乙醇。最后晾干RNA沉淀，将其溶解在无RNA酶的水中总RNA的质量检测提取出来的RNA需要进行质量检测，以确定其质量和纯度。以下是一些常用的质量检测方法：视觉检查观察提取的RNA溶液的颜色和清澈度。优质的RNA应该是无色的并且非常透明** absorbance at 260 and 280 nm**使用紫外分光光度计测定RNA溶液在260和280nm处的吸光度。260nm处吸光度代表RNA的总量，而280nm处吸光度代表蛋白质的量。优质的总RNA应该具有较高的260/280比值，通常大于1.8** electrophoresis**将提取的RNA进行琼脂糖凝胶电泳，可以观察到RNA的主要带型，包括28S和18S rRNA，以及是否存在其他杂质。优质的RNA应该具有清晰的28S和18S rRNA条带，并且没有其他可见的杂质斑点杂交将提取的RNA进行斑点杂交，可以检测特定RNA分子的存在。例如，可以使用探针来检测18S和28S rRNA的含量实时荧光定量PCR (qPCR)这是一种非常灵敏的方法，可以检测特定基因的表达水平。通过选择特定的引物，可以检测提取的RNA中特定基因的表达情况在所有这些步骤中，确保无RNA酶污染是非常重要的。任何微小的错误步骤都可能导致RNA降解，从而影响后续的分析结果。因此，在操作RNA时，应尽量减少与皮肤、金属和塑料表面的接触，并使用无RNA酶的试剂和设备。