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圆明园建筑特点
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质粒小提试剂盒的配方,内容包括配方所需的溶液以及实验的具体步骤PPT

以下是一般质粒小提试剂盒的主要配方及其实验步骤。需要注意的是,不同的试剂盒可能会有一些特定的配方和步骤。以下内容仅供参考,请务必根据你所使用的试剂盒的说明...
以下是一般质粒小提试剂盒的主要配方及其实验步骤。需要注意的是,不同的试剂盒可能会有一些特定的配方和步骤。以下内容仅供参考,请务必根据你所使用的试剂盒的说明书进行操作。1. Buffer P1 (pH 8.0)50 mM NaOH10 mM EDTA50 mL NaOH (1 M stock)1.6 mL EDTA (0.5 M stock)适量的水调整总体积至100 mL混合上述成分,用1 M NaOH调整pH至8.0,分装到1 mL小管中,每管100 μL,保存。2. Buffer P2 (pH 8.0)1 M Tris-HClpH 8.01.25 M NaCl0.5% SDS25 mL Tris-HCl (1 M stock)6.25 g NaCl1.25mL SDS (10% stock)适量的水调整总体积至100 mL混合上述成分,用1 M Tris-HCl调整pH至8.0,分装到1 mL小管中,每管100 μL,保存。3. Buffer P3 (pH 8.0)50 mM Tris-HClpH 8.050 mM NaCl10 mM EDTA50 mL Tris-HCl (1 M stock)5 g NaCl1.6 mL EDTA (0.5 M stock)适量的水调整总体积至100 mL混合上述成分,用1 M Tris-HCl调整pH至8.0,分装到1 mL小管中,每管100 μL,保存。4. Buffer P4 (pH 8.0)无水乙醇(至少99.9%)或等效的工业级乙醇10 mM Tris-HClpH 8.01 mM EDTApH 8.02% Triton X-100(可选)2% NP-40(可选)2% Brij-58(可选)2% Tween-20(可选)2% SDS(可选)2% Protamine sulfate(可选)d] 注释在准备这个溶液时,应特别注意乙醇的纯度。如果使用工业级乙醇,可能需要先进行蒸馏或离子交换纯化。如果乙醇中含有杂质,可能会在后续步骤中导致DNA的沉淀或不可逆的变性。制备方法:混合上述成分,用1 M Tris-HCl调整pH至8.0。注意:这个配方可能需要根据试剂盒的具体要求进行调整。例如,一些试剂盒可能会要求使用特定的去垢剂或离子强度。请务必根据你使用的试剂盒的说明书进行操作。质粒小提实验步骤质粒小提实验步骤通常分为以下几步:步骤一:细胞裂解将细胞悬浮液与Buffer P1混合,通过加入Buffer P1来使细胞裂解。这一步通常在冰上进行。步骤二:加入Buffer P2加入Buffer P2以中和Buffer P1并使细胞进一步裂解。同时加入的SDS有助于细胞膜的破裂。这一步通常在冰上进行。步骤三:加入Buffer P3并按压加入Buffer P3并按压,以除去未破碎的细胞和细胞碎片。这一步通常在冰上进行。步骤四:酚/氯仿抽提将上清液转移到新的离心管中,加入等体积的酚/氯仿(酚/氯仿体积应为上清液体积的步骤五:氯仿抽提氯仿抽提以去除酚相中的蛋白质。这一步通常在室温下进行。步骤六:氯仿抽提再次进行氯仿抽提以进一步去除蛋白质。这一步通常在室温下进行。**步骤七:乙醇沉淀